免疫共沉淀檢測（CO-IP）

德泰生物提供免疫共沉淀（CO-IP）檢測服務。可對兩種已知蛋白是否存在相互作用進行驗證，也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白（X）與目的蛋白（Y）在同一細胞內孵育，形成“靶蛋白-目的蛋白”復合物。將靶蛋白的特異性抗體與復合物共孵育，形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復合物，利用Proterin A/G純化。通過SDS-PAGE銀染，結合Western Blot及液相質譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進行定性分析。

服務優勢

• 使用銀染技術，靈敏度是考馬斯亮藍100倍，SDS-PAGE電泳結果更加清晰；
• 擁有液相質譜及Fortebio等完整配套檢測設備，可對檢測結果進一步分析；
• 實驗重復進行兩次，排除隨機因素影響，結果更加可靠；
• 擁有蛋白、抗體等制備平臺，您只需提供序列便可完成全部實驗；

免疫共沉淀服務內容

樣品要求

蛋白樣品

1. 直接提供蛋白樣品：動植物組織/器官或含有誘餌蛋白及目標蛋白的裂解液；
2. 提供表達質粒：質粒需測序驗證，提供測序峰圖，防止基因模板或表達質粒本身堿基突變，造成實驗延誤；
3. 提供基因序列：客戶提供序列，由德泰負責誘餌蛋白或目標蛋白的表達。

檢測抗體

1. 客戶提供：用于免疫檢測的抗體>20ul；
2. 德泰提供：由德泰提供相關的抗體（詳情可咨詢客服）。

Co-IP案例

圖1：CO-IP實驗SDS-PAGE圖與SDS-PAGE銀染圖

Lane 1：抗X抗體

Lane 2：總蛋白+ 抗X抗體

Lane 3：總蛋白+ 抗X抗體 + ProteinA 磁珠結合后流出

Lane 4：總蛋白+ 抗X抗體 + ProteinA 磁珠洗脫

Lane 5：總蛋白+ ProteinA 磁珠結合后流出

Lane 6：總蛋白+ ProteinA 磁珠洗脫 M：SDS-PAGE Marker

該案例為驗證總蛋白中是否含有可以與已知蛋白X發生相互作用的未知蛋白Y。Lane 5~lane 6為對照實驗，防止總蛋白與 ProteinA 磁珠的非特異性結合。已知X蛋白的大小為80KD，觀察銀染圖的洗脫條帶，在55KD左右存在疑似與蛋白X發生結合的未知蛋白Y。取洗脫液進一步進行液相色譜分析及fortebio檢測，最終驗證55KD左右的蛋白Y可以與已知蛋白X發生相互作用。

免疫共沉淀應用

a. 動物植物生理活動研究；

b. 分子生物學研究；

c. 物種及微生物鑒定；

免疫共沉淀原理

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的蛋白相互作用研究的經典方法。其原理為：將靶蛋白X與目標蛋白Y在細胞內共同孵育，形成復合物X-Y。如果用靶蛋白X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種已知蛋白是否在體內結合，也可用于確定細胞內是否存在與已知蛋白相互作用的未知蛋白。（詳細免疫共沉淀原理介紹）

圖2：Co-IP實驗原理

CO-IP優缺點