德泰生物提供免疫共沉淀(CO-IP)檢測服務。可對兩種已知蛋白是否存在相互作用進行驗證,也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白(X)與目的蛋白(Y)在同一細胞內孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”復合物。將靶蛋白的特異性抗體與復合物共孵育,形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復合物,利用Proterin A/G純化。通過SDS-PAGE銀染,結合Western Blot及液相質譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進行定性分析。
服務內容 | 交付內容 | 周期 | 價格 |
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分子間相互作用檢測 (CO-IP實驗) |
相互作用分析報告(包括SDS-PAGE結果、WB結果、液相質譜結果等) | ~2周 | 詢價 |
圖1:CO-IP實驗SDS-PAGE圖與SDS-PAGE銀染圖
Lane 1:抗X抗體
Lane 2:總蛋白+ 抗X抗體
Lane 3:總蛋白+ 抗X抗體 + ProteinA 磁珠結合后流出
Lane 4:總蛋白+ 抗X抗體 + ProteinA 磁珠洗脫
Lane 5:總蛋白+ ProteinA 磁珠結合后流出
Lane 6:總蛋白+ ProteinA 磁珠洗脫 M:SDS-PAGE Marker
該案例為驗證總蛋白中是否含有可以與已知蛋白X發生相互作用的未知蛋白Y。Lane 5~lane 6為對照實驗,防止總蛋白與 ProteinA 磁珠的非特異性結合。已知X蛋白的大小為80KD,觀察銀染圖的洗脫條帶,在55KD左右存在疑似與蛋白X發生結合的未知蛋白Y。取洗脫液進一步進行液相色譜分析及fortebio檢測,最終驗證55KD左右的蛋白Y可以與已知蛋白X發生相互作用。
a. 動物植物生理活動研究;
b. 分子生物學研究;
c. 物種及微生物鑒定;
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的蛋白相互作用研究的經典方法。其原理為:將靶蛋白X與目標蛋白Y在細胞內共同孵育,形成復合物X-Y。如果用靶蛋白X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種已知蛋白是否在體內結合,也可用于確定細胞內是否存在與已知蛋白相互作用的未知蛋白。(詳細免疫共沉淀原理介紹)
圖2:Co-IP實驗原理
優點 | 缺點 |
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